Heal with Rife ライフ周波数療法 総合ブログ

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「ありがとう」は波動が良く、「有難う」だと良くない。「ありがとう」の暗号。ありがとう=「アルファ」が「オメガ」。ゲマトリア・語呂合わせ。

「ありがとう」は平仮名で書くと良いらしい。

漢字で「有難う」だと波動/周波数が(相対的に)落ちる。

「あることが難しい」というのは、
言霊/アファメーションとしては望ましくない。

ありがとう/感謝の波動はよいけど。

そもそもこの「有難う」の漢字は当て字だったと思う。だから元々あったものではないはず。


在り/有り=存在する=1=アルファ

とう=十=10=オメガ

ありがとう=「アルファ」が「オメガ」

「アルファ」=「オメガ」

神仏習合みたいなニュアンスかと。

ちなみに、神よりは神、仏よりは佛を使うべし。

旧字のほうが周波数が高い。



X=ローマ数字の10

X=終わり

クロス
十字架

最後=お尻=ケツ=ゲツ=月

 

アルファにしてオメガ

新約聖書ヨハネの黙示録」から》

最初にして最後であること。全部。すべて。

「アルファでありオメガである」とも。
アルファにしてオメガとは? 意味・使い方をわかりやすく解説 - goo国語辞書

 

ギリシア語原文1:8 】 【新改訳改訂第3版】 

神である主、今いまし、昔いまし、後に来られる方、万物の支配者がこう言われる。 

「わたしはアルファであり、オメガである。」
http://meigata-bokushin.secret.jp/index.php?%E3%82%A2%E3%83%AB%E3%83%95%E3%82%A1%E3%81%A7%E3%81%82%E3%82%8A%E3%80%81%E3%82%AA%E3%83%A1%E3%82%AC%E3%81%AA%E3%82%8B%E6%96%B9

 

 

 

 

 

 

 

 

 

オーストラリア上院が過剰死亡に関する正式な調査を開始。

世界初: 豪州上院、過剰死に関する調査設置を決議

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オーストラリアのある上院議員が、1年がかりで進めてきた努力がついに実を結んだ。 昨日、オーストラリア上院は、過剰死亡事故に関する議会調査委員会を設置することを議決し、おそらく世界初のこの種の調査にゴーサインを出したのである。

「この委員会のプロセスが、遺族の声を代弁し、わが国が切実に必要としている答えを導き出してくれますように」とラルフ・バベット上院議員は語った。

委員会は2024年8月31日までに報告書を提出する予定である。

以下翻訳。
https://expose-news.com/2024/03/27/australian-senate-votes-for-inquiry-into-excess-deaths/

 

(3) Heal with Rife ライフ周波数療法 音で病気を癒す HwR on X: "世界初: 豪州上院、過剰死に関する調査設置を決議 " オーストラリアのある上院議員が、1年がかりで進めてきた努力がついに実を結んだ。 昨日、オーストラリア上院は、過剰死亡事故に関する議会調査委員会を設置することを議決し、おそらく世界初のこの種の調査にゴーサインを出したのである。…" / X (twitter.com)

 

"
ニュース:オーストラリア上院が過剰死亡に関する正式な調査を開始

何が過剰死亡を引き起こしているのか?コビッドか?ロックダウン?シェディング?オーストラリア国民はその解明に一歩近づいた。

オーストラリア上院は本日、国の過剰死亡に関する議会調査設置を議決し、おそらく世界初のこの種の調査に白羽の矢を立てた。

連合オーストラリア党のラルフ・バベト上院議員がこの調査にゴーサインを出すまでに要した時間は、1年と5回の動議であった。

バベット上院議員は昨年3月、オーストラリアの過剰死亡率に関する調査を求める2つの動議を提出したが不採択となり、今年2月にも不採択となった。

その数週間後、上院に調査の必要性を認めるよう求める4回目の動議が賛成多数で可決され、上院の態度が一変し、最終的に調査を設置する今日の投票への道が開かれた。

「5度目の正直だ!」バベット上院議員は、動議が無事可決された後の声明でこう述べた。

「これは世界的な問題に対する世界初の調査である。この委員会のプロセスが遺族の声を代弁し、わが国が切実に必要としている答えを届けてくれますように」。

この動議は、無所属のジャッキー・ランビー上院議員とデービッド・ポーコック上院議員の共同提案によるもので、地域問題参考委員会に対し、2021年から2023年にかけての超過死亡の要因について調査を行い、その対処法について勧告を行うよう求めるものである。

投票は31対30で、左派の労働党緑の党のみが反対した(詳しい内訳はこちら)。

何が過剰死亡の原因なのか?コビッドか?ロックダウン?シェディング?オーストラリア国民は今、その解明に一歩近づいている。

オーストラリアではパンデミック期間中、記録的な高い超過死亡率を記録し、2022年には基準値を11.7%上回るピークに達した。この数字は当初15%にも上ると言われていたが、オーストラリア統計局(ABS)は2023年に新たなモデルを採用し、超過死亡者数を下方修正した。

2023年の超過死亡者数は減少したものの、ABSの報告によると、超過死亡者数は2023年前半まで「持続的」で「統計的に有意」であった。

出典 オーストラリア統計局
ABSが本日発表した数字によると、2023年の死亡者数の大半は基準値を上回っているが、第31週から第43週にかけては基準値内に収まっている。

オーストラリアにおける死因の第1位は依然としてがんで、前年比で全死因の約3分の1を占め、認知症、呼吸器疾患、心臓疾患がこれに続く。2022年、コヴィッドは死因の第6位であったが、2023年には第8位に落ちた。

出典 オーストラリア統計局
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当然ながら、オーストラリアや世界中で見られる過剰死亡の一部はコビドに起因するものであるが、ウイルスが過剰死亡のすべてを説明することはできない。実際、コビッドに起因する死亡の基準が緩いため、過剰死亡率に対するウイルスの影響はおそらく過大評価されている。

当初、ABSはコビッドのみによる死亡と他の原因による死亡を区別し、コビッドによる死亡のわずか8.6%がウイルスのみによるものであることを明らかにした。その後、この報告方法は廃止され、原因となる一連の出来事(既往の慢性疾患を含む)を伴う死亡はすべて「コビッドによる」カテゴリーに振り分けられ、コビッドによる死亡の割合は8%から約80%になった。

COVID-19 オーストラリアの死亡率、2022年1月31日までに登録された死亡数。出典 出典:オーストラリア統計局
それでも、オーストラリアの保険数理機関の最高峰であるアクチュアリー協会による2022年の超過死亡率の分析では、オーストラリアの超過死亡の半分しかコビッドに起因していない。

そのため、残りの超過死亡率は説明できない。

アクチュアリーたちは、オーストラリアの過剰死亡を引き起こしている他の要因として、死亡率の変動、未診断のコビド、精神衛生上の問題、不健康なパンデミックに影響されたライフスタイルの変化などを挙げている。後者2つは、政府のパンデミック政策がもたらした影響である。

オーストラリア医療従事者協会(AMPS)が主導した独立した過剰死亡調査は、過剰死亡のもう一つの潜在的要因として、コビッド・ワクチネーション・プログラムの影響を強調した。

AMPSの調査報告で特に興味深かったのは、コビッド接種前でワクチン接種後のクイーンズランド州住民を対象に実施された全死因死亡傾向に関するオーストラリアの調査である。この分析によると、死亡率はコビッドではなく、コビッド・ワクチンの展開とともに上昇傾向に転じた。

クイーンズランド州の死亡率データによると、60歳以上の全死因死亡率が顕著に上昇したのは、プライマリーシリーズのワクチン展開と同時期であり、コビッドが地域に普及する前であった。AMPS調査の発表者の一人、アンドリュー・マドリー博士による分析。
オーストラリア医薬品庁(TGA)が公式に認めているコビドワクチン関連の死亡例は14例のみであるが、2024年3月12日現在、オーストラリアの安全性監視データベースであるDAENに記録されている死亡例は1,020例以上、負傷例は140,000例以上である。

出典 DAEN
過少報告はこのような安全性監視システムのよく知られた特徴であるため、コビドワクチンによる危害の本当の程度は不明である。

TGAは昨年9月、DAENに報告された有害事象のうち、コビドワクチンと因果関係があると判断したものが何件あるかについては明言を避けたが、TGAはほぼすべての報告について、因果関係を肯定も否定もしない『可能性あり』としている、と口を滑らせた。

過剰死亡の他の潜在的要因としては、パンデミック対応に起因する危害、例えば監禁、隔離、雇用の喪失、自律性の喪失、ストレスの増加などが考えられるが、これらはすべてコビッド王立委員会の付託事項に関する調査への提出書類で提起されたものである。

過剰死亡に関するオーストラリアの調査委員会は、これらすべてを検討することになるだろう。委員会は2024年8月31日までに報告書を提出する予定である。

*訂正: 訂正:当初の見出しでは、オーストラリア政府が超過死亡に関する正式な調査委員会を設置したと記載されていました。オーストラリア上院に訂正いたします。
"

翻訳です。
https://news.rebekahbarnett.com.au/p/breaking-australian-government-establishes

 

(3) Heal with Rife ライフ周波数療法 音で病気を癒す HwR on X: "" ニュース:オーストラリア上院が過剰死亡に関する正式な調査を開始 何が過剰死亡を引き起こしているのか?コビッドか?ロックダウン?シェディング?オーストラリア国民はその解明に一歩近づいた。…" / X (twitter.com)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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ファイザー社COVID-19 mRNAワクチン1回投与で2,000億以上のDNA断片を発見。

ファイザー社COVID-19 mRNAワクチン1回投与で2,000億以上のDNA断片を発見。

 

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癌ゲノミクスの専門家であるフィリップ・バックホーツ博士は最近、サウスカロライナ州上院でファイザー社のmRNA COVID-19ワクチンに見られるDNA汚染について証言した。博士によれば、ファイザー社のCOVID-19ワクチン1回分には推定2000億個のプラスミドDNAが含まれているとのことである。 これらのDNA断片は、基本的には合成ウイルスである脂質ナノ粒子にパッケージされ、被接種者の細胞に送り込まれる。

フィリップ・バックホーツ博士はサウスカロライナ大学教授である。 生化学と分子生物学の博士号を持ち、癌ゲノム研究を行っている。 つまり、彼と彼のチームは、あるはずのない場所にあるDNAを検出するスペシャリストなのだ。

月12日、彼はサウスカロライナ州上院医療問題特別委員会で、保健環境管理局(DHEC)について証言した。

ファイザーのシェディングはプラスミドDNAに汚染されています。単なるmRNAではなく、DNAの断片が入っているのです』。とバックハルト教授は語った。

サウスカロライナ州コロンビアでワクチン接種プログラムを担当していた同僚は、使用された2つのバッチから、中身の残骸が入ったファイザーのバイアルをすべて保管していた。 その残骸から、バックホーツ教授はこれらのバイアルに含まれていたDNAの塩基配列を決定した。「シェディングの中身を見ることができ、DNAがあることに驚きました。そして、それが何であるか、どのようにしてそこに到達したかを解明することができます。人間の健康と生物学の両方の観点から、このことがもたらす可能性のある結果について、私はある種の憂慮を抱いています」と彼は言った。

「私の考えでは、このDNAは、心停止による死亡のような、まれだが深刻な副作用を引き起こす可能性がある。

「このDNAは、ワクチン・ミックスでトランスフェクションされた細胞のゲノムDNAに組み込まれる可能性があり、また組み込まれる可能性が高い。 そしてその多くが細胞のDNAに入り込み、細胞の永久的な固定物となる。 一時的なものではない。 だから、私はこのDNAがシェディングに含まれていることを憂慮しているんだ。RNAとは違い、永久的なものだからです」。

確かな分子生物学に基づけば、このDNAがその組織に対する持続的な自己免疫攻撃を引き起こす可能性は、理論的にはあり得るが、妥当な懸念である、と彼は言う。

「また、人によっては、将来癌になる危険性も理論的にはある。ゲノムのどこにこのDNAが存在するかによって、腫瘍抑制因子を阻害したり、がん遺伝子を活性化したりする可能性があります。「稀なケースでしょうが、リスクはゼロではないと思います』。

「DNAは寿命の長いものです。 「DNAは長命なものである。DNAは何十万年も生き続ける。

バックホーツ教授は、ファイザーのシェディング・ワクチンのDNAは大量にあると説明した。 5000塩基対や500塩基対のものもあるが、ほとんどは100塩基対程度である。しかし、DNA断片がヒトゲノムに統合される確率は、その大きさとは無関係だからである。 「ゲノムのリスクは粒子の数の関数に過ぎません。「シェディングに含まれるこれらの小さなDNA断片はすべて、被接種者の細胞を変化させる何千回もの機会を与える。

「しかし、その過程でゲノム改変の危険性が増加したのです。

バックハルト教授の研究チームは、これらの小さなDNA断片をすべて取り出し、その出所を特定するために "接着剤でくっつけた"。 その結果、10万個のDNAをつなぎ合わせた後、そのDNAがヒューレット・パッカード社からスピンオフして1999年に設立されたカリフォルニアのライフサイエンス企業、アジレント社からオンラインで購入できるプラスミドに由来することを突き止めた。

ファイザー社がこのプラスミドを手に入れ、そこにスパイクをクローン化し、RNAポリメラーゼとこのプラスミドを投入してmRNAのコピーを大量に作り、このmRNAを脂質ナノ粒子のトランスフェクション剤と混ぜ合わせ、mRNAワクチンを完成させたことは明らかである。 しかし、彼らはこれを行う前にDNAを取り出すことに失敗した・・・血漿の小さな断片がすべてRNAと一緒にパッケージされるように、DNAを切り刻む努力はした。 DNAの塩基配列を見ただけでも、何が起こったかは明らかです。

このプロセスは、緊急承認(EUA)を得るために使用されたシェディングのプロセスとは異なると彼は説明した。 つまり、COVID-19を大量に注射するキャンペーンの前に、臨床試験に使われたバッチにはDNAは含まれていなかったのだ。DNA混入の問題は、ファイザー社がEUAを取得した後、数百万から数十億回分を一般に投与するために製造規模を拡大したときに初めて発生したのである。

「もし、20億コピーのプラスミドがあるとすれば、おそらく2000億コピーのプラスミドDNAがワクチンの各用量に含まれていることになります。

数千億個のプラスミドDNAは脂質ナノ粒子に封入され、細胞内に送り込まれる。 「これは悪い考えです。 「DNAは基本的に合成ウイルスに内包され、その中身を細胞内に送り込むことができる。

プラスミドDNAがゲノムの中に組み込まれているかどうかを調べるために、シェディングを受けた人の何人かを検査することを彼は勧めた。 この害は証明できる。 他のシェディングの害では、時期的に疑われることはあっても、それを証明することはできない。「しかし、この害の場合は証明することができます。 [もし、害を受けた人の幹細胞からそれが見つかれば、それは死んだ人からある種の鉛が見つかるのと同じことです。
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以下の翻訳です。
https://thepeoplesvoice.tv/fda-issues-urgent-warning-higher-risk-of-deadly-seizures-in-toddlers-after-covid-vaccination/

 

(14) Heal with Rife ライフ周波数療法 音で病気を癒す HwR on X: "" ファイザー社COVID-19 mRNAワクチン1回投与で2,000億以上のDNA断片を発見 癌ゲノミクスの専門家であるフィリップ・バックホーツ博士は最近、サウスカロライナ州上院でファイザー社のmRNA…" / X (twitter.com)

 

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ファイザー社COVID-19 mRNAワクチン1回投与で2,000億以上のDNA断片を発見

癌ゲノミクスの専門家であるフィリップ・バックホーツ博士は最近、サウスカロライナ州上院でファイザー社のmRNA COVID-19ワクチンに見られるDNA汚染について証言した。

博士によれば、ファイザー社のCOVID-19ワクチン1回分には推定2000億個のプラスミドDNAが含まれているとのことである。 これらのDNA断片は、基本的には合成ウイルスである脂質ナノ粒子にパッケージされ、被接種者の細胞に送り込まれる。

フィリップ・バックホーツ博士はサウスカロライナ大学教授である。 生化学と分子生物学の博士号を持ち、癌ゲノム研究を行っている。 つまり、彼と彼のチームは、あるはずのない場所にあるDNAを検出するスペシャリストなのだ。

月12日、彼はサウスカロライナ州上院医療問題特別委員会で、保健環境管理局(DHEC)について証言した。

ファイザーのシェディングはプラスミドDNAに汚染されています。単なるmRNAではなく、DNAの断片が入っているのです』。とバックハルト教授は語った。

サウスカロライナ州コロンビアでワクチン接種プログラムを担当していた同僚は、使用された2つのバッチから、中身の残骸が入ったファイザーのバイアルをすべて保管していた。 

その残骸から、バックホーツ教授はこれらのバイアルに含まれていたDNAの塩基配列を決定した。「シェディングの中身を見ることができ、DNAがあることに驚きました。そして、それが何であるか、どのようにしてそこに到達したかを解明することができます。

人間の健康と生物学の両方の観点から、このことがもたらす可能性のある結果について、私はある種の憂慮を抱いています」と彼は言った。

「私の考えでは、このDNAは、心停止による死亡のような、まれだが深刻な副作用を引き起こす可能性がある。

「このDNAは、ワクチン・ミックスでトランスフェクションされた細胞のゲノムDNAに組み込まれる可能性があり、また組み込まれる可能性が高い。 そしてその多くが細胞のDNAに入り込み、細胞の永久的な固定物となる。 一時的なものではない。 

だから、私はこのDNAがシェディングに含まれていることを憂慮しているんだ。RNAとは違い、永久的なものだからです」。

確かな分子生物学に基づけば、このDNAがその組織に対する持続的な自己免疫攻撃を引き起こす可能性は、理論的にはあり得るが、妥当な懸念である、と彼は言う。

「また、人によっては、将来癌になる危険性も理論的にはある。ゲノムのどこにこのDNAが存在するかによって、腫瘍抑制因子を阻害したり、がん遺伝子を活性化したりする可能性があります。「稀なケースでしょうが、リスクはゼロではないと思います』。

「DNAは寿命の長いものです。 「DNAは長命なものである。DNAは何十万年も生き続ける。

バックホーツ教授は、ファイザーのシェディング・ワクチンのDNAは大量にあると説明した。 5000塩基対や500塩基対のものもあるが、ほとんどは100塩基対程度である。

しかし、DNA断片がヒトゲノムに統合される確率は、その大きさとは無関係だからである。 「ゲノムのリスクは粒子の数の関数に過ぎません。「シェディングに含まれるこれらの小さなDNA断片はすべて、被接種者の細胞を変化させる何千回もの機会を与える。

「しかし、その過程でゲノム改変の危険性が増加したのです。

バックハルト教授の研究チームは、これらの小さなDNA断片をすべて取り出し、その出所を特定するために "接着剤でくっつけた"。

その結果、10万個のDNAをつなぎ合わせた後、そのDNAがヒューレット・パッカード社からスピンオフして1999年に設立されたカリフォルニアのライフサイエンス企業、アジレント社からオンラインで購入できるプラスミドに由来することを突き止めた。

ファイザー社がこのプラスミドを手に入れ、そこにスパイクをクローン化し、RNAポリメラーゼとこのプラスミドを投入してmRNAのコピーを大量に作り、このmRNAを脂質ナノ粒子のトランスフェクション剤と混ぜ合わせ、mRNAワクチンを完成させたことは明らかである。 しかし、彼らはこれを行う前にDNAを取り出すことに失敗した・・・血漿の小さな断片がすべてRNAと一緒にパッケージされるように、DNAを切り刻む努力はした。 DNAの塩基配列を見ただけでも、何が起こったかは明らかです。

このプロセスは、緊急承認(EUA)を得るために使用されたシェディングのプロセスとは異なると彼は説明した。 つまり、COVID-19を大量に注射するキャンペーンの前に、臨床試験に使われたバッチにはDNAは含まれていなかったのだ。DNA混入の問題は、ファイザー社がEUAを取得した後、数百万から数十億回分を一般に投与するために製造規模を拡大したときに初めて発生したのである。

「もし、20億コピーのプラスミドがあるとすれば、おそらく2000億コピーのプラスミドDNAがワクチンの各用量に含まれていることになります。

数千億個のプラスミドDNAは脂質ナノ粒子に封入され、細胞内に送り込まれる。 「これは悪い考えです。 「DNAは基本的に合成ウイルスに内包され、その中身を細胞内に送り込むことができる。

プラスミドDNAがゲノムの中に組み込まれているかどうかを調べるために、シェディングを受けた人の何人かを検査することを彼は勧めた。 この害は証明できる。 他のシェディングの害では、時期的に疑われることはあっても、それを証明することはできない。「しかし、この害の場合は証明することができます。 [もし、害を受けた人の幹細胞からそれが見つかれば、それは死んだ人からある種の鉛が見つかるのと同じことです。
"


以下の翻訳です。
https://expose-news.com/2024/03/27/experts-discover-over-200billion-dna-fragments-in-a-single-dose-of-pfizers-covid-19-mrna-vaccine/

 

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日本酒の5ALがワクチンの毒素を解毒。アルコールは酸化グラフェンやスパイクタンパクを除去する?

アルコールは酸化グラフェンやスパイクタンパクを除去する?

アルコール=酸化グラフェンやスパイクタンパクを除去。

 

つまりワクチンの毒素を解毒。

 

日本酒の5ALがワクチンを解毒。

 

アルコールはコロナを防ぐので街の飲み屋は真っ先に規制された。

 

日本酒は、ワクチンの毒である、

スパイクタンパクと酸化グラフェンの両方の解毒に良いといいますね。

 

特に純米が良いらしいです。

 

酒粕をシェディング対策でとる。

 

酒粕の5ALAは大量摂取すると若返り効果が有るらしい?

 

コロナウイルス(ワクチン)に効くアミノ酸5-ALAが多く含まれるのが日本酒やワイン。 

タバコもコロナ感染を防ぎます。

 

酒粕のアルコールの飛ばし方

"
お料理などに使う時には、ビール以上のアルコールが含まれている酒粕ですが、アルコールの飛ばし方は、
加熱することによってアルコール分は、気体となって空気中に飛んでいきます。飛ばし方としては、78℃以上の加熱が必要です。

では、甘酒は沸騰させて作るのでアルコール分は含まれていないのか?と言う疑問がありますよね。

加熱したとしても完全にアルコールを飛ばすことはできないようです。

だいたい1パーセント強のアルコールは残ってしまいます。
"

https://vivre-media.jp/2007

 

5-アミノレブリン酸(5-ALA)による新型コロナウイルス感染症(COVID-19)オミクロン株に対する感染抑制を確認|長崎大学 (nagasaki-u.ac.jp)

 

飲酒の頻度が高い人=
新型567ワクチンの毒の影響を受けにくい。

アルコールが酸化グラフェンやスパイクタンパクを解毒/除去してくれるから?


飲酒の頻度が高い人は新型コロナワクチンの効果が出にくい 千葉大病院が確認 | TECH+(テックプラス)
https://news.mynavi.jp/techplus/article/20210603-1898852/

 

酒に弱い体質、コロナ感染に防御的 佐賀大学の研究員らが成果まとめ 飲酒後に顔が赤くなる「アジアンフラッシュ体質」(佐賀新聞) - Yahoo!ニュース

 

飲酒や喫煙の習慣がある人= 新型567ワクチンの毒の影響を受けにくい。

タバコもアルコールも酸化グラフェンやスパイクタンパクを解毒/除去するから?

飲酒や喫煙の習慣がある人は、
新型コロナワクチンによる抗体価が上がりにくい

 

飲酒や喫煙の習慣がある人は、新型コロナワクチンによる抗体価が上がりにくい

飲酒や喫煙の習慣がある人は、新型コロナワクチンによる抗体価が上がりにくい(倉原優) - エキスパート - Yahoo!ニュース

 

新型コロナウイルスワクチンの免疫賦活剤としての5-ALA + SFC含有食品を用いた
臨床試験プロジェクトが“ニュートライングリディエント賞“を受賞

新型コロナウイルスワクチンの免疫賦活剤としての5-ALA + SFC含有食品を用いた臨床試験プロジェクトが“ニュートライングリディエント賞“を受賞(SBIホールディングス, photonamic)|ニュースリリース|SBIホールディングス (sbigroup.co.jp)

 

(3) Heal with Rife ライフ周波数療法 音で病気を癒す HwR on X: "アルコール🟰グラフェンやスパタン除去 つまりワクチンの毒素を解毒 日本酒の5ALがワクチンを解毒。 アルコールはコロナを防ぐので街の飲み屋は真っ先に規制された。 日本酒は、ワクチンの毒である、スパイクタンパクと酸化グラフェンの両方の解毒に良いといいますね。…" / X (twitter.com)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

定量的プロテオミクスにより、イベルメクチンの幅広い抗ウイルス特性が明らかになり、COVID-19治療に有益であることが明らかになった。

定量的プロテオミクスにより、
イベルメクチンの幅広い抗ウイルス特性が明らかになり、
COVID-19治療に有益であることが明らかになった。

 

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ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)、ヒトパピローマウイルス(HPV)、エプスタイン・バーウイルス(EBV)、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)、コロナウイルス重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2[SARS-CoV-2])などのウイルスは、世界中でヒトの健康に大きな負担をかけている。FDA認可の抗寄生虫薬であるイベルメクチンは、抗菌薬、抗ウイルス薬、抗がん剤でもあり、世界的な公衆衛生を改善する可能性をより多く提供しており、in vitroでSARS-CoV-2の複製を効果的に阻害することができる。本研究では、ヒト卵巣がん細胞におけるイベルメクチン関連ウイルス感染経路の変化を明らかにすることを目的とした。Stable isotope labeling by amino acids in cell culture(SILAC)定量プロテオミクスを用いて、イベルメクチン(20μmol/L)を24時間投与したヒト卵巣がん細胞TOV-21Gと非投与のヒト卵巣がん細胞TOV-21Gを解析し、卵巣がん細胞におけるイベルメクチン関連タンパク質4447個を同定した。パスウェイネットワーク解析の結果、HCMV、HPV、EBV、HIV1感染経路を含む4つの統計的に有意な抗ウイルス経路が明らかになった。興味深いことに、GencLip3から報告された284のSARS-CoV-2/COVID-19関連遺伝子と比較すると、イベルメクチン投与時と非投与時で52のSARS-CoV-2/COVID-19関連タンパク質の変化が同定された。SARS-CoV-2/COVID-19関連遺伝子284個と、イベルメクチンによって制御されるSARS-CoV-2/COVID-19関連タンパク質52個の相互作用に基づいて、タンパク質-タンパク質ネットワーク(PPI)を構築した。PPIネットワークの分子複合体検出解析により、サイトカインと成長因子ファミリー、MAPキナーゼとGタンパク質ファミリー、HLAクラスタンパク質を含む3つのハブモジュールが同定された。Gene Ontology解析により、統計的に有意な10の細胞成分、13の分子機能、11の生物学的プロセスが明らかになった。これらの知見は、イベルメクチンの広範な抗ウイルス特性が、ウイルス関連疾患における予測、予防、個別化医療の文脈において、COVID-19治療に有益であることを示している。

1. 本研究は、ヒト細胞におけるイベルメクチン関連のウイルス感染経路変化を同定することを目的とした。

2. 定量的プロテオミクスにより、イベルメクチン関連タンパク質が、ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)、ヒトパピローマウイルス(HPV)、エプスタイン・バーウイルス(EBV)、ヒト免疫不全ウイルス1(HIV1)、COVID-19感染経路を含む4つの抗ウイルス経路に統計学的に有意に関与していることが明らかになった。

3. 3.重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2(SARS-CoV-2)/COVID-19に関連する52のタンパク質の変化を、イベルメクチン投与時と非投与時に同定し、これらのタンパク質はサイトカインと成長因子ファミリー、MAPキナーゼとGタンパク質ファミリー、HLAクラスタンパク質に関与していた。

4. これらの知見は、イベルメクチンの広範な抗ウイルス特性が、ウイルス関連疾患における予測、予防、個別化医療の文脈で、COVID-19治療に有益であることを示している。

1. はじめに

大村は1973年に、イベルメクチンを産生するユニークで驚異的な微生物を発見した(Burgら、1979年)。その後、イベルメクチンはヒトの健康に対して高い安全性と有効性を示したため、商品化された。イベルメクチンの現状は、科学者を驚かせ、興奮させ続けていた(Laing, Gillan, & Devaney, 2017)。イベルメクチンはもともと広域抗寄生虫薬であり、オンコセルカ症、ストロンギロイド症、リンパ系フィラリア症、疥癬を獣医学および人体医学的に治療することを目的としていた(Chabala et al.) イベルメクチンの優れた利点は、30年以上にわたってイベルメクチンを単剤で投与しているヒト集団においても、寄生虫に薬剤耐性が確認されなかったり、薬剤耐性の増加がみられなかったことである(van Wyk & Malan, 1988)。メカニズム的には、イベルメクチンの主な標的はグルタミン酸ゲートのクロライドチャネルである(Abdeltawabら、2020)。しかし、イベルメクチンは免疫防御機構と密接に関係し、宿主の免疫を回避する寄生虫の能力を抑制する免疫調節剤のように作用すると考えられるようになってきた(Schallerら、2017)。今日、イベルメクチンの新たな使用により、イベルメクチンは比較的知られていない薬剤となった。薬剤の再利用と再配置は、まったく新しい範囲の疾患を制御することが示されている(Ashour, 2019)。例えば、眼窩筋炎、トリチノーシス、マラリア、リーシュマニア症、アフリカトリパノソーマ症、喘息、てんかん、神経疾患、抗ウイルス(例えば、ヒト免疫不全ウイルス[HIV]、デング熱脳炎;Yang et al、 2020)、抗菌(結核、ブルーリ潰瘍;Csókaら、2018)、抗がん(乳がん白血病膠芽腫、子宮頸がん、胃がん卵巣がん、大腸がん、黒色腫、肺がん;Crump、2017)。多面的な「驚異」であるイベルメクチンは、将来さらに優れた薬になるかもしれない。国際特許「イベルメクチンおよびその誘導体の使用」は、当時、イベルメクチンに対する人々の関心を高めていた。イベルメクチンは、代謝関連疾患(糖尿病、高コレステロール血症、インスリン抵抗性、肥満、高トリグリセリド血症、高血糖)、フェミソイドX受容体を介する疾患(動脈硬化、非アルコール性脂肪性肝疾患、胆汁うっ滞、胆石)、炎症、がんなどに使用するために開発されるだろう(Crump, 2017)。

HIV、ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)、エプスタイン・バーウイルス(EBV)、ヒトパピローマウイルス(HPV)、新型重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2(SARS-CoV-2)などのウイルスは、世界的にヒトの健康にとって大きな負担となっている。例えば、HIV-1感染者は全世界で3700万人近くおり、毎年100万人近くの患者がヒト免疫不全ウイルス感染と後天性免疫不全症候群(AIDS)関連疾患で死亡している(Huynh & Gulick, 2020)。HIVは免疫系にダメージを与え、CD4細胞を主に死滅させるため、患者は肺炎、サイトメガロウイルス、クリプトコッカス髄膜炎結核クリプトスポリジウム症、口腔鵞口瘡、トキソプラズマ症、がん(カポジ肉腫、リンパ腫;Nash & Robertson, 2019)などの様々な病気にかかりやすくなる。HCMVはβヘルペスウイルスであり、ヒト集団内での有病率は55%~100%である。HCMVは、西洋世界では、すべての出生児(1%~2.5%)において最も一般的な感染症の1つである(Buxmann, Hamprecht, Meyer-Wittkopf, & Friese, 2017)。HCMVの子宮内感染は、視覚障害、低出生体重、難聴、さまざまな程度の精神遅滞、肝脾腫、小頭症などの先天性異常を引き起こす可能性がある(Zavattoni et al.) HCMVはヒトの免疫反応を回避するさまざまなメカニズムを獲得した(Britt, 2008)。例えば、HCMVはウイルスUL16とUL142タンパク質によってNK細胞の活性を阻止した。HCMVはIL-10のウイルスホモログを獲得し、抗サイトメガロウイルス免疫を抑制した(Holder & Grant, 2019)。HCMVはまた、ウイルスUS11、US2、US3タンパク質による抗原処理と提示を防ぐために、主要組織適合性複合体の発現をダウンレギュレートした(Britt, 2008)。HCMVはまた、感染細胞のアポトーシスを防ぐタンパク質(UL36とUL37)を進化させ、宿主内でのHCMVの播種を促進した(Andoniou & Degli-Esposti, 2006)。EBVは単核球症を引き起こすヘルペスウイルスの仲間である。多くの人が無症候性感染であったが、EBVとバーキットリンパ腫などの他のリンパ増殖性疾患(非悪性、前悪性、悪性疾患)との潜在的な関連が広く研究された(Rezk, Zhao, & Weiss, 2018)、 ホジキンリンパ腫、血球貪食性リンパ組織球症、胃がん、中枢神経系リンパ腫、急性小脳失調症(Nussinovitch, Prais, Volovitz, Shapiro, & Amir, 2003)、上咽頭がん、毛様白板症(Marques-Piubelli et al. , 2020). EBVは様々な細胞に感染するが、B細胞と上皮細胞に好んで感染する。B細胞膜融合はgHgL gp42の3つの部分からなる糖タンパク質複合体によって媒介されるが、上皮細胞膜融合はgHgLの2つの部分からなる複合体によって媒介される(Shannon-Lowe, Rowe, 2014)。HPVの約90%は無症状感染であったが、HPV感染はイボや前癌病変を引き起こす。HPV、特にHPV16とHPV18の亜型に感染した部位は、子宮頸部、膣、外陰部、口、陰茎、咽頭、肛門など、がんのリスクが高い(Athanasiou et al.) HPVは非統合エピソームとDNAへの統合で癌を引き起こすと考えられていた。HPV遺伝子の一部(E6およびE7)は、がん遺伝子として作用し、悪性化を促進した(Hoppe-Seyler, Bossler, Braun, Herrmann, & Hoppe-Seyler, 2018)。E6タンパク質はp53タンパク質と結合し、p53の不活性化をもたらした(Almeida, Queiroz, Sousa, & Sousa, 2019)。E7は形質転換タンパク質として働き、転写因子E2Fへの結合をめぐって網膜芽細胞腫タンパク質(pRb)と競合し、細胞周期を前進させた(Almeida et al.) SARS-CoV-2はコロナウイルス病2019(COVID-19)の発生につながり、急速に世界的大流行へと発展した。科学者たちはCOVID-19の治療法の開発に着手したが、この深刻な課題を解決するための抗SARS-CoV-2薬やワクチンは承認されていない(H. Li et al.) 全世界では、700万人以上がSARS-CoV-2に感染しており、国家レベルでは40万人以上が死亡している(Lai, Shih, Ko, Tang, & Hsueh, 2020)。ウイルス感染に対抗する最も安全で効果的な方法を開発するためのさらなる研究が急務であった。イベルメクチンは、多くのウイルスによる感染を抑えることが実証されており、幅広いスペクトラム活性を持つ可能性がある(Yang et al.) 例えば、イベルメクチンは、インポーティンα/β核内インポートに依存する抗HIV-1が報告されている(Wagstaff, Sivakumaran, Heaton, Harrich, & Jans, 2012)。イベルメクチンは、PAK-1活性の阻害を通じて、MAPK経路の活性化を抑える可能性がある。高含量スクリーニングにより、イベルメクチンはEBV陽性およびEBV陰性の上咽頭がん細胞に対する有望な薬剤であることも同定された(Gallardo, Mariamé, Gence, & Tilkin-Mariamé, 2018)。男性のHPVによって引き起こされる性器ヘルペス感染症には、経口イベルメクチンが有効な治療選択肢となるかもしれないが、現在まで正式には承認されていない(Buechner, 2002)。さらに重要なことに、イベルメクチンはSARS-CoV-2の阻害剤として報告されており、SARS-CoV-2に感染した細胞に1回添加するだけで、ウイルスRNAを〜5000倍減少させる効果があった(Caly, Druce, Catton, Jans, & Wagstaff, 2020)。

ウイルスは依然として、最も解明されていない病原体のひとつである。メカニズムや宿主と寄生虫の相互作用に関する知識が不足しているため、シェディングの開発には限界がある。イベルメクチンは、入手の難しさ、生産コストの高さ、突然変異の確率の高さ、抵抗性の多さなど、いくつかの面で困難に直面している。イベルメクチンは、抗寄生虫、抗がん、抗菌、抗ウイルス剤として、世界の公衆衛生を改善する可能性がある。本研究では、イベルメクチン関連のプロテオミクスプロファイリングと分子ネットワークの変化を明らかにするために、安定同位体標識細胞培養アミノ酸(SILAC)定量プロテオミクス解析を用いた。我々は、HCMV感染、HPV感染、EBV感染、HIV1感染などのウイルス関連経路に注目した。さらに興味深いことに、同定されたタンパク質の多くがSARS-CoV-2/COVID-19と関連していることが報告された。これらの結果から、イベルメクチンは幅広い抗ウイルス薬である可能性が示された。SILAC定量プロテオミクスは、ウイルス関連経路におけるイベルメクチンの分子メカニズムを証明した。さらに、SARS-CoV-2関連タンパク質のタンパク質間相互作用(PPI)ベースのハブモジュールは、COVID-19の予測、予防、個別化医療(PPPM)の文脈で、COVID-19疾患の重要な分子を発見した。

2. 材料と方法

2.1. SILAC処理細胞

ヒト卵巣細胞株(TOV-21G;Keibai Academy of Science、南京、中国)を、2種類のSILAC試薬(Thermo Fisher Scientific)で培養した(1つは、100 mg/L l-lysine-2HClおよび100 mg/L l-arginine-HCl[「ライト」標識試薬=L]および10%ウシ胎児血清[FBS]を補充したl-リジン[K]およびl-アルギニン[R]を含まないRPMI 1640培地であった; Gibco]、もう一つはl-リジン[K]とl-アルギニン[R]を含まないRPMI1640培地に100mg/L l-リジン-2HCl[13C6,15N2]と100mg/L l-アルギニン-HCl[13C6,15N4]を添加したものである["重い "標識試薬=H; [13C6,15N2]は残基Kで8質量単位増加、[13C6,15N4]は残基Rで10質量単位増加を意味する]および10%FBS)を添加し、5%CO2、37℃で維持し、培地を2日ごとに更新した。培養細胞への安定同位体の完全な取り込みを確実にするため、12C14N(light = L)および13C15N(heavy = H)標識アミノ酸を用いたSILAC試薬で合計10継代処理した。

2.2. SILAC標識細胞のイベルメクチン処理
我々の以前の研究で、TOV-21G細胞をイベルメクチン(0~60μM)で24時間処理した場合、イベルメクチンのIC50は22.54μMであり、また20μMのイベルメクチン(IC50 22.54μMより小さい)はTOV-21Gの細胞増殖と遊走を有意に抑制し、TOV-21G細胞を良好な状態に維持することが判明した(N. Li & Zhan, 2020)。そこで、H-およびL-安定同位体標識培地で培養したTOV-21G細胞を、ジメチルスルホキシド(DMSO)中20μMのイベルメクチン、またはコントロールと同量のDMSOで24時間処理した。イベルメクチン処理したTOV-21G細胞を遠心分離(800g)し、PBSで洗浄(×3)した後、タンパク質単離バッファー[7M尿素、2mMチオ尿素、4%CHAPS(3-[(3-コラミドプロピル)-ジメチルアンモニオ]-1-プロパン)、100mMジチオスレイトール(DTT)、2%両性溶媒]にボルテックス(×5)で懸濁(30分、4℃)した。抽出されたタンパク質溶液を遠心分離した(13,000g、20分、4℃)。上清を抽出タンパク質サンプルとし、そのタンパク質濃度を2-D quant kitで調べた。

2.3. SILAC標識効率解析
抽出したタンパク質サンプルを超音波処理し、遠心分離した(14,000g、25℃、40分)。H-およびL-安定同位体標識タンパク質を等しく混合し(1:1)、12.5%ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE;20μg/lane;定電流14mA、90分)で分離し、クマシーブリリアントブルーで染色した。SDS-PAGEで分離したタンパク質は、還元、アルキル化、トリプシンによる消化、質量分析(MS)による同定を行った。タンパク質へのSILAC-同位体の組み込み効率は、Rappsilberの方法(Rappsilber, Ishihama, & Mann, 2003)を用いて推定した。本研究では、SILAC標識効率は最大97%であった。

2.4. タンパク質消化およびLC-分画
抽出したタンパク質サンプルを最終濃度 100 mM DTT で処理し、沸騰させ(水浴;5 分)、0.1 M Tris-HCl, pH 8.5 中の 8 M 尿素 200 μl とともに 10 kD の限外ろ過遠心チューブに移し、遠心した(14,000 g, 15 分;×2)。限外ろ過遠心チューブ中のタンパク質サンプルを、0.05 M ヨードアセトアミド、8 M 尿素、0.1 M Tris-HCl, pH 8.5 の溶液 100 μl で処理(暗室、30 分、室温)した後、遠心分離した(14,000g, 15 分)。ヨードアセトアミド処理したタンパク質サンプルを、0.1 M Tris-HCl, pH 8.5中8 M尿素100 μlで処理し、遠心分離(14,000g, 15分; ×3)した後、25 mM NH4HCO3溶液100 μlで処理し、遠心分離(14,000g, 15分; ×3)した。処理したタンパク質サンプルを40μlの100mM NH4HCO3中の2μgのトリプシン40μlと混合(600rpm、1分間振盪)し、振盪、静置(37℃、16-18時間)し、遠心分離(14,000g、15分間)のために新しい収集管に移し、次いで40μlの25mM NH4HCO3と混合し、遠心分離(14,000g、15分間)して、濾液をトリプシンペプチド混合物として収集した。ペプチド含量を定量した(OD280)。液体クロマトグラフィー(LC)を用いて、トリプシンペプチド混合物を逆LC-タンデム質量分析(LC-MS/MS)分析用の15個のペプチド画分に分画した。

2.5. LC-MS/MS
各ペプチド画分を、Q Exactive質量分析計(Thermo Fisher Scientific)と組み合わせたEasy nLC(Proxeon Biosystems、現Thermo Fisher Scientific)で60分間LC-MS/MS分析に供した。得られたMS/MSスペクトルデータを用いて、MaxQuantソフトウェアでタンパク質の同定と定量を行い、タンパク質データベースと照合した。軽アイソトープと重アイソトープの強度を用いて、イベルメクチンで処理した(重標識=H)TOV-21G細胞と処理しない(軽標識=L)TOV-21G細胞の間で発現量の異なるタンパク質を決定した。

2.6. バイオインフォマティクスと統計解析
Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)パスウェイ解析をclusterProfiler (https://bioconductor.org/packages/release/bioc/html/clusterProfiler.html; Yu, Wang, Han, & He, 2012)を用いて行い、同定されたタンパク質に基づくシグナル伝達経路を見出した(p < .05、および調整p < .05)。報告されたSARS-CoV-2関連遺伝子はGenCLiP3 (http://ci.smu.edu.cn/genclip3/; Wang et al., 2019)で検索した。Cytoscape ClueGO (Bindea et al., 2009)を用いて、同定されたタンパク質から濃縮された生物学的プロセス(BPs)、分子機能(MFs)、細胞成分(CCs)を明らかにした(両側超幾何検定、Benjamini-Hochbergで補正した調整後p < .05)。報告されたSARS-CoV-2関連遺伝子は、STRING 10.0 (http://string-db.org/cgi/input.pl; Szklarczyk et al., 2015)により、PPIネットワーク構築のためのパラメータ(共発現スコア>0.700)の信頼度で解析された。次に、PPI全体をCytoscapeソフトウェア(バージョン3.2.1; National Resource for Network Biology)を用いて分子複合体検出(MCODE; Bader & Hogue, 2003)で解析し、ハブモジュール(スコア>6)を得た。統計的有意性はp < .05とした。Benjamini-Hochbergを用いて、パスウェイ内のタンパク質間の関連性の確率をp値で調整した。

3. 結果

3.1. SILAC定量プロテオミクス解析により、イベルメクチンの幅広い抗ウイルス特性が明らかになった。

SILACベースの定量プロテオミクスにより、イベルメクチンを投与した卵巣がん細胞と投与していない卵巣がん細胞で、合計4447個のイベルメクチン関連タンパク質が同定された(表S1)。さらにKEGGパスウェイ解析を行った結果、HCMV(図S1A)、HPV(図S1B)、EBV(図S1C)、HIV1(図S1D)感染経路を含む4つのウイルス関連経路(表1)と、8つの細菌関連経路(表1)が明らかになった、 上皮細胞への細菌侵入、ビブリオコレラ感染、ヘリコバクター・ピロリ感染における上皮細胞シグナル伝達、病原性大腸菌感染、赤痢サルモネラ感染、レジオネラ症、エルシニア感染などであった(図S2)。これらの濃縮されたパスウェイは、イベルメクチンが抗菌・抗ウイルス剤であることを示し、イベルメクチンの関連メカニズムを解明する手がかりとなった。

3.2. イベルメクチンによって制御されるSARS-CoV-2関連タンパク質
報告されているSARS-CoV-2関連遺伝子をGenCLiP3で検索し、284のSARS-CoV-2関連遺伝子をまとめた(表S2)。さらに、52のSARS-CoV-2関連タンパク質がイベルメクチンによって制御された(表2)。その中には、AKT1、ALB、ANPEP、APOE、APP、ATG5、B2M、BSG、CASP3、CAV1、CDC42、COL4A2、COPB2、CTSB、EEF1A2、EGFR、G6PD、HLA-A、HMGB1、 hspa4、idh2、ifitm3、il18、itch、itpa、kpna2、kpnb1、lims1、mapk1、mapk14、mapk8、mb、mgmt、mtor、nfkb1、pak1、 PARP1、PML、PPP1CA、PRKAA1、RB1、SARS、SARS2、SLTM、STAT1、TGFB1、TIMM8A、TRPV1、UBL5、ZC3HAV1、HMOX1、IL1F10。これらのイベルメクチン制御SARS-CoV-2関連タンパク質には、正常TOV-21G群(SILAC: L)と比較して、イベルメクチン処理TOV-21G群(SILAC: H)で存在量が減少した50のタンパク質が含まれる: SILAC定量プロテオミクスで同定された、存在量比(H/L)<1のイベルメクチン処理TOV-21G群(SILAC:H)と正常TOV-21G群(SILAC:L)と比較して存在量が増加し、存在量比(H/L)>1の2つのタンパク質(HMOX1およびIL1F10)。

共発現スコアが0.7以上のタンパク質間相互作用分子を選択し、SARS-CoV-2関連遺伝子284個のPPIネットワークを構築した(図1aおよび表S3)。PPIネットワーク全体をMCODEを用いてさらに解析したところ、3つのモジュールが見つかった(モジュール1スコア=18、モジュール2スコア=11、モジュール3スコア=7;図1b-d)。これらのハブ分子は、SARS-CoV-2の根底にある重要な分子メカニズムの理解を深めるのに役立った。ハブモジュール1は主にサイトカインと成長因子ファミリーに関与しており、20のハブ分子IL1B、IL1A、IL18、CCL2、CCL3、IL13、CCL4、CXCL8、CCL5、TNF、IL10、IL7、IL5、CSF2、CSF3、TLR2、IFNG、CXCL10、IL4、IL17Aが含まれる。ハブモジュール2は、主にMAPキナーゼファミリーとGタンパク質ファミリーに関与しており、23のハブ分子MAPK14、MAPK3、VEGFA、AGT、AGTR2、MAPK1、IL6R、STAT1、MAPK8、P2RY12、JUN、KNG1、JAK1、EGFR、JAK2、CRP、PTGS2、HMOX1、C3、IL6、TLR4、IL2、SAA1が含まれる。ハブモジュール3は主にHLAクラスタンパク質に関与しており、7つのハブ分子HLA-A、HLA-DRB1、B2M、NCAM1、PML、HLA-DPB1、HLA-Eが含まれていた。さらに、イベルメクチンによって制御される52のSARS-CoV-2関連タンパク質もPPIネットワークを構築するために用いられた(図1e)。いくつかの重要な分子は、増殖と成長(MAPK1、MAPK14、MAPK8、EGFR、PAK1)、オートファジー(AKT1、MTOR、ATG5)、炎症(IL18、IL1F10、STAT1、TGFB1、NFKB1)において重要な役割を果たしていることがよく知られていた。これらのイベルメクチンが制御するSARS-CoV-2関連タンパク質が、PPIネットワークの中心に位置していることに注目すべきである。

3.3. イベルメクチンによって制御される52のSARS-CoV-2関連タンパク質の細胞内プロセスの変化
イベルメクチンによって制御されるSARS-CoV-2関連タンパク質のGene Ontology(GO)濃縮解析では、11の統計的に有意なBP、10の細胞成分(CC)、13のMFを含む多くの細胞プロセスの変化が得られた(図2および表S4)。BP解析の結果、多くのSARS-COV-2関連タンパク質は、タンパク質の輸入、活性酸素種の代謝過程の制御、筋肉細胞の増殖、結合の正の制御、宿主との相互作用、リポ多糖に対する細胞応答、金属イオンに対する細胞応答、細胞内タンパク質輸送の正の制御、骨髄細胞の恒常性、多くの細胞の恒常性、赤血球の恒常性において濃縮されていた(図2a)。CC解析では、多くのSARS-CoV-2関連タンパク質が、カベオラ、初期エンドソーム膜、特異的顆粒内腔、血小板α顆粒、血小板α顆粒内腔、フィコリン-1に富む顆粒、フィコリン-1に富む顆粒内腔、エンドソーム内腔、COPIIでコートされた小胞体からゴルジ体への輸送小胞、および食細胞小胞膜に濃縮されていることが示された(図2b)。MF解析によると、多くのSARS-CoV-2関連タンパク質は、リンタンパク質結合、タンパク質結合の負の調節、脂質キナーゼ活性、脂質キナーゼ活性の調節、結合の正の調節、タンパク質結合の正の調節、DNA結合の調節、DNA結合の正の調節、酸化還元酵素活性の調節、酸化還元酵素活性、モノオキシゲナーゼ活性の調節、一酸化窒素合成酵素活性、一酸化窒素合成酵素活性の調節に濃縮されていた(図2c)。

図2
機能およびパスウェイの濃縮解析。(a)52個のイベルメクチン制御SARS-CoV-2関連タンパク質の生物学的プロセス濃縮解析。(b)イベルメクチンによって制御されたSARS-CoV-2関連タンパク質52個の細胞成分濃縮解析。(c)52個のイベルメクチン制御SARS-CoV-2関連タンパク質の分子機能濃縮解析。Benjamini-Hochberg法で補正したp値<0.05の遺伝子セットのみが有意とみなされた。p値が小さく、有意に濃縮されているものほど、ノードのサイズが大きい。同じ色は同じ機能グループを示す。各グループの中で、最も有意な項とラグを強調した代表的なものを選んだ。SARS-CoV-2, 重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2型

3.4. SARS-CoV-2に関連する52のイベルメクチン制御タンパク質の、ウイルス関連パスウェイ間での重複性
イベルメクチンによって制御されたSARS-CoV-2関連タンパク質のウイルス関連パスウェイ上での重複をベン図によって構築したところ(図3aおよび表S5)、これら5つのグループ(EBV、HCMV、HIV、HPV、SARS-CoV-2)の中で、HLA-A、AKT1、NFKB1、CASP3を含む4つのイベルメクチンによって制御されたSARS-CoV-2関連タンパク質が同定された。SILAC定量プロテオミクス解析により、イベルメクチンの広範な抗ウイルス特性が明らかになったため、ウイルス関連経路の中でイベルメクチンが制御するSARS-CoV-2関連タンパク質の重複をさらに研究することが重要かもしれない。現在、SARS-CoV-2の重要性から、SARS-CoV-2関連タンパク質として、ZC3HAV1、ITPA、ALB、COPB2、IL1F10、KPNB1、SLTM、 HMOX1、CTSB、IDH2、LIMS1、G6PD、UBL5、TGFB1、PML、IFITM3、CAV1、SARS、ITCH、MGMT、ATG5、HSPA4、SARS2、KPNA2、PRKAA1、ANPEP、APP、MB、BSG、TRPV1、IL18、TIMM8A、PPP1CA、HMGB1、APOE、PARP1、EEF1A2などである。

図3
イベルメクチンによって制御されたSARS-CoV-2関連タンパク質のウイルス関連経路と染色体上の位置との重複解析。(a)ウイルス関連パスウェイ間のイベルメクチン制御SARS-CoV-2関連タンパク質の重複をベン図により構築した。(b) イベルメクチンによって制御された52のSARS-CoV-2関連タンパク質のタンパク質発現に対応する染色体位置。EBV、エプスタイン・バーウイルス;HCMV、ヒトサイトメガロウイルス;HPV、ヒトパピローマウイルスSARS-CoV-2、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2

イベルメクチンによって制御されたSARS-CoV-2関連タンパク質の発現に対応する染色体位置をプロットした。これらの5つのグループ(EBV、HCMV、HIV、HPV、SARS-CoV-2)の中で同定された4つのイベルメクチン制御SARS-CoV-2関連タンパク質は異なる染色体に局在しており、HLA-Aは第6染色体に、AKT1は第14染色体に、NFKB1とCASP3は第4染色体に局在していた(図3b、表S6)。

4. 考察
イベルメクチンは、長い間、抗寄生虫薬として、高度に発達した動物において非常に安全であることが証明されてきた。その主なメカニズムは、無脊椎動物(低発達動物)において神経伝達を遮断するグルタミン酸とγ-アミノ酪酸の塩化物依存性チャネルを標的とするためである。ヒトでは血液脳関門が存在し、中枢神経系を十分に保護することができる(Develoux, 2004)。イベルメクチンが薬剤耐性を引き起こすことはほとんどなく、副作用のほとんどはイベルメクチンそのものではなく、抗原の放出に関連したものであった(Boussinesq, 2005)。イベルメクチンの良好な耐性は、小児や乳児でも示された。合計170人の幼児と小児(体重15kg未満)にイベルメクチンを経口投与したところ、軽度な有害事象が報告されたのは7人だけで、重篤なものではなかった(Levyら、2020年)。妊婦のイベルメクチン曝露後の重篤な事象(死産、自然流産、新生児死亡、先天異常)についての既存のエビデンスを評価したところ、妊娠した893人の女性から低出生体重児、新生児死亡、早産、母体の罹患の報告はなく、イベルメクチンの高い安全性が示されたが、妊娠中のイベルメクチンの確実な安全性を結論づけるにはまだ不十分であった(Nicolas et al.) 抗寄生虫薬イベルメクチンの薬物動態に関する研究では、他の疾患でイベルメクチンを使用する際に参考となる、いくつかの基準値が示された。被験者(n=68)は、現在ヒトへの使用が承認されている用量(FDAが承認しているイベルメクチンの最高用量は200μg/kg)よりも高用量または高頻度で投与された。その結果、イベルメクチンはFDA認可の最高用量の10倍(2000μg/kg)であっても一般的に忍容性が高く、中枢神経系毒性を伴うことはほとんどないことが示された。さらに、平均曲線下面積比は30mg投与で1.24、60mg投与で1.40であり、イベルメクチンの蓄積は最小限であった(Guzzo et al.) 多くの患者がイベルメクチンを投与されたことから、イベルメクチンは安全で忍容性の高い薬剤であることが示された。このことは、イベルメクチンが臨床応用において大きな価値を持つ可能性を高めた。

イベルメクチンは将来の抗ウイルス剤開発の基礎になると考えられ、イベルメクチンの広範な抗ウイルス活性として多くの研究が報告されている。例えば、イベルメクチンはチクングニアウイルスRNAの合成を減少させ、ウイルスタンパク質の発現をダウンレギュレーションし、ウイルスの感染サイクルに影響を与えた(Varghese et al.) イベルメクチンは核輸送阻害作用を有し、ハイスループット・スクリーニングにより、インポーティンα/β核内インポートの広域阻害剤であることが証明された。さらに、イベルメクチンはHIV-1とデングウイルスの複製を阻害することができた(Wagstaffら、2012年)。また、ある研究では、イベルメクチン投与が、ウイルスDNA合成と子孫ウイルス産生を用量依存的に阻害することにより、仮性狂犬病ウイルス感染を阻害することが示された。この過程で、核局在化シグナル経路を標的とすることにより、UL42の核局在化もイベルメクチンによって影響を受けた(Lvら、2018)。本研究では、KEGGパスウェイ解析により、HCMV、HPV、EBV、HIV1感染経路を含む4つのウイルス関連経路が示された。これら4つのイベルメクチン制御ウイルス関連パスウェイには、合計362個のタンパク質が含まれていた。これらのタンパク質の多くは、ウイルス感染の結果と密接に関連していた。NFKBは、紫外線照射、酸化フリーラジカル、サイトカイン、細菌やウイルス産物など、様々な細胞内外の刺激によって活性化される転写制御因子である。単純ヘルペスウイルスのE3ユビキチンリガーゼであるICP0タンパク質は、NF-κBのp65およびp50サブユニットと結合することで、腫瘍壊死因子α(TNF-α)が仲介する核因子κB(NF-κB)の活性化を有意に抑制し、このことが単純ヘルペスウイルスの病因や免疫回避に寄与している可能性がある(J. Zhang, Wang, & Zheng, 2013)。DDX58は、RNAヘリカーゼ-DEADボックスタンパク質モチーフとカスパーゼリクルートメントドメインを含むタンパク質をコードする。DDX58は、免疫応答のウイルス制御と二本鎖RNA認識に関与している。さらに、DDX58は他の宿主由来遺伝子やI型インターフェロンの転写誘導を仲介し、免疫病理の変化をもたらす(Rehwinkel & Gack, 2020)。EIF2AK2はセリン/スレオニンプロテインキナーゼをコードしており、dsRNAとの結合後、自己リン酸化によって活性化される。コードされたタンパク質の活性化型は翻訳開始因子EIF2S1をリン酸化し、その結果タンパク質合成が阻害される。EIF2AK2は、I型インターフェロン刺激遺伝子の一つとして、重要な生物学的および免疫学的機能を示した。ウイルス感染では、EIF2AK2はウイルス複製を阻害または促進した(Weiら、2020)。HCMV感染経路に関しては、合計85のイベルメクチン関連タンパク質が同定されている。そのうちのいくつかは、これまでの研究でイベルメクチンが介在していることが報告されている。例えば、イベルメクチンはミトコンドリアのカルシウムイオン過負荷、ミトコンドリア膜電位、活性酸素種の発生を消失させることにより、上皮細胞のアポトーシスを誘導した。メカニズム的アプローチとして、イベルメクチンはAKT、PI3K、MAPK経路を含む細胞シグナル伝達経路を制御した(Lee et al.) イベルメクチンはまた、CCND1およびCDK4のダウンレギュレーションを介してG1期の細胞周期停止を制御し、細胞増殖を阻害した(Diao et al.) HPV感染経路に関しては、合計107種類のイベルメクチン関連タンパク質が同定されている。同定された関連タンパク質のいくつかは、これまでの研究でイベルメクチンが介在することが報告されている。例えば、イベルメクチンはBCL-2発現のダウンレギュレーション、BAX発現、切断ポリ[ADP-リボース]ポリメラーゼ、CASP3活性のアップレギュレーションによってアポトーシスを誘導した(Deng, Xu, Long, & Xie, 2018)。イベルメクチンは、P糖タンパク質活性を直接阻害するのではなく、EGFRの細胞外ドメインと結合してEGFRの活性化とその下流のシグナル伝達を阻害することにより、P糖タンパク質の転写を低下させた(Jiang, Wang, Sun, & Wu, 2019)。EBV感染経路に関しては、合計79のイベルメクチン関連タンパク質が同定されている。そのうちのいくつかは、以前の研究でイベルメクチンによって媒介されることが報告されている。例えば、イベルメクチンは、LPSで細胞を刺激した後、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ(MAPK8)のリン酸化を阻害することにより、一酸化窒素合成酵素およびシクロオキシゲナーゼ-2酵素を阻害することが証明された(X. Zhang et al.) イベルメクチンは、特定のエピジェネティック制御因子SIN3Aを含むマルチターゲットと相互作用することから、抗寄生虫薬から、再配置された抗菌薬、抗ウイルス薬、抗がん薬になる可能性がある(Juarez, Schcolnik-Cabrera, & Dueñas-Gonzalez, 2018)。HIV1感染経路に関しては、合計91のイベルメクチン関連タンパク質が同定されている。そのうちのいくつかは、これまでの研究でイベルメクチンが介在していることが報告されている。例えば、イベルメクチンによるオートファジー誘導は、ユビキチン化を介した分解経路を介したP21活性化キナーゼ1(PAK1)の発現低下と関連していた(Dou et al.)

SARS-CoV-2の発生と大流行により、世界中がこの公衆衛生上の緊急事態を懸念している。疫学的研究によると、SARS-CoV-2は伝播速度が速く、予防措置をとらない場合、1回の感染で1.4~3.9人の新規感染者が出ると推定されている(Benvenuto et al.) このウイルスは主に密接な接触や呼吸器飛沫を介して伝播する。多くの研究者が、SARS-CoV-2がアンジオテンシン変換酵素2(ACE2)という受容体に結合してヒトの細胞に侵入することを証明した(Letko, Marzi, & Munster, 2020)。FDA認可の抗寄生虫薬であるイベルメクチンは、SARS-CoV-2の阻害剤として最近の研究で何度も報告されている(Caly et al.) イベルメクチンは、インポーティン(IMPα/β1)を阻害し、酸性環境を作り出すことによって、ウイルスのインポートを媒介する(Caly et al.) Calyらは、SARS-CoV-2のRNA量において、イベルメクチン投与群(5μMイベルメクチン)と対照群の間で5000倍の減少が見られたと報告している。SARS-CoV-2に対するイベルメクチンのIC50は約2.5μMと計算された。健康なボランティアを対象とした以前の薬物動態学的研究によると、イベルメクチンの単回投与量は120mgまでで、安全かつ忍容性が高いことが示唆された(Chaccour, Hammann, Ramón-García, & Rabinovich, 2020)。最近の研究では、定量的トランスラトミクスとSILACベースのプロテオミクスにより、ヒト結腸上皮がん細胞株におけるSARS-CoV-2感染に対する細胞応答のシグナル伝達経路プロファイルが同定され、解糖、翻訳、スプライシング、プロテオスタシス、ヌクレオチド合成が含まれた(Bojkova et al.) 本研究では、ヒト卵巣がん細胞株TOV-21Gの解析にSILACを用いた。興味深いことに、GencLip3(n = 284)から報告されたSARS-CoV-2/COVID-19関連遺伝子と比較すると、イベルメクチンを投与した場合と投与しなかった場合で、52個のSARS-CoV-2/COVID-19関連タンパク質の変化が同定された。例えば、CD147(BSG)がコードするタンパク質も免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、前駆細胞/幹細胞への直接的なウイルス侵入の可能性はCD147(BSG; Ulrich & Pillat, 2020)を介して報告されていた。RB1は細胞周期の負の制御因子であり、最初に発見された癌抑制遺伝子であった。SARS-CoV-1との構造相同性から、SARS-CoV-2はpRbを直接障害する可能性が示唆された。SARS-CoV-2による卓越した炎症反応と強い酸化ストレスを考慮すると、SARS-CoV-2が高い発癌リスクと関連するかどうかは、長期間観察する必要がある(Alpalhão, Ferreira, & Filipe, 2020)。SARS-CoV感染患者では、IL-1β、MCP-1、IL-6、TNF-α、TGF-β1など、炎症性サイトカインの発現レベルの上昇が、急性肺障害と病態形成に密接に関連していた(He et al.) 我々のデータはまた、イベルメクチンがTNFB1、IL18、IL1F10のような、SARS-CoV-2誘発サイトカインストームにおける主要なインターロイキンを制御することを同定した。イベルメクチンは、新型コロナウイルス感染に対して作用する可能性があるようであった。我々は、SARS-CoV-2感染の治療に使用されるイベルメクチンのメカニズムを提供した。

5. 結論
本研究は、我々の知る限り、SILAC定量プロテオミクス解析によってイベルメクチンが制御するウイルス関連経路を初めて明らかにしたものであり、イベルメクチンの広範な抗ウイルス特性を明らかにした。さらにエキサイティングなことは、同定されたイベルメクチン制御タンパク質の中には、報告されているSARS-CoV-2関連タンパク質も含まれており、SARS-CoV-2感染症の治療における潜在的なイベルメクチン関連バイオマーカーや新規メカニズムの開発に役立つ可能性があることである。イベルメクチンと他の薬剤を併用することで、COVID-19患者の予後がより良好になる可能性がある。たとえば、ある研究では、ヒドロキシクロロキンとイベルメクチンの併用が、COVID-19の治療に結果的かつ相乗的な作用を示すかもしれないと仮定している(Patrì & Fabbrocini, 2020)。今回の結果は、SARS-CoV-2感染の治療に用いられるイベルメクチンの分子メカニズムを理解するための指針になると期待される。さらに、今回の研究結果は、PPPMの研究と実践の文脈において、COVID-19の治療の選択肢としてイベルメクチンを開発するための知見を提供するものである。

"

下記より翻訳致しました。

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7536980/

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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三大天使(ミカエル・ガブリエル・ラファエル)の意味と数秘術。3の数字の意味と数秘術。三角形の意味。ゲマトリア。カバラ数秘術。語呂合わせ。

三大天使(ミカエル・ガブリエル・ラファエル)の意味と数秘術
3の数字の意味と数秘術
三角形の意味。


三大天使(ミカエル・ガブリエル・ラファエル)の意味は?

3の数字の意味は?

3が「み」なのはわかりますよね?

じゃあ、「き」が3になる理由を解説します。





tree
tri 3
trio トリオ


triとは
 「3…」「3 倍の」「3 重…」の意
https://ejje.weblio.jp/content/tri


"
3を意味する英語はTri です。

Triangle (トライアングル)、Trio (トリオ)、Triple (トリプル)、
いずれも数字の3の意味が含まれます。

でも以前テレビで「トリビアの泉」ってありましたね。
このトリビア (Trivia) の意味は3ではなく、
つまらないとかささいなという意味です。

同じTriがついてるけどなんか関係あるの?
"
https://atob.jp/column/41.html


「triangle」(三角形)
「tri」(3つの)+「angle」(角度)

angle 角度
angel 天使


triangle
triangel
tri angel
3つの天使
三大天使


三大天使(ミカエル・ガブリエル・ラファエル)

三大天使① 大天使ミカエル

ミカエル
Me帰る
我にかえる
自分に戻る
大元につながる
ソースにつながる。
元いた世界に戻る。(霊界など。)


三大天使② 大天使ガブリエル

ガブリエル
かぶりエル
かんむり得る
冠得る
王冠得る
コロナ得る
567得る

コロナ(corona)…ラテン語で王冠を意味する言葉。

567
ゴロナ
コロナ

10 6 7
こ  ろ な

あいうえおかきくけこ
12345678910

かぶり
被り

かぶる
被る
重複する
重なる


三大天使③ 大天使ラファエル

ラファエル
Laughter得る
笑い得る
笑いを得る

Laugher得る
笑う人を得る


ミカエル=我にかえる=ソースにつながる。

ガブリエル=かんむり得る=王冠得る

ラファエル=Laughter得る=笑い得る


笑い≒王冠≒我(ソース)?


①笑い
②王冠
③我(ソース)


Laughter is the best medicine. 
笑いは百薬の長。


角度
角 かど。つの。
かど
ガッド
ゴッド
god


三角形のすべての角度の総和は180度。

180
18
666

18
十八番
おはこ


弥勒菩薩【ミロクぼさつ】

666  6+6+6=18
567  5+6+7=18
369  3+6+9=18

369
ミロク


911

9x(1+1)=18
9x2=18

911
711



さん
sun
太陽

太陽=魂=愛=神

太陽=魂

sol = soul


ここから先は、33の意味につながります。
あとは、ミロクですね。


666は愛と平和の数字だった!? 369,666,567=ミロク=オーム=18=love=810=ハート。
https://royalraymond.healwithrife.com/entry/2024/01/31/235429

https://note.com/heal_with_rife/n/n7eeffe8a6c20

悪魔の数字666の意味は阿吽(オーム)だった!?
弥勒菩薩【ミロク】369=666=567。
コルナサイン、ピースサイン(Vサイン)の意味もオーム?
https://note.com/heal_with_rife/n/na5f34ac73fd7

https://royalraymond.healwithrife.com/entry/2023/07/12/042623

悪魔崇拝(サタニズム)の正体は土星崇拝(堕天使崇拝)。 
仏崇拝≒月信仰≒潜在意識崇拝≒男性崇拝≒陰エネルギー崇拝。
エル(EL)崇拝/天使崇拝。 v.s. 女神崇拝(神崇拝・金星崇拝・太陽崇拝) 
三種の神器とは?
https://note.com/heal_with_rife/n/na21b9f06b04b

ニコラ・テスラの369の法則の意味は666(ミロクぼさつ)? テスラ・コードとは?
オーム(aum)・三神。ソルフェジオ周波数との関連は? 
https://royalraymond.healwithrife.com/entry/2023/11/20/090013

悪魔の数字666と108の数字の関係は?369、666、567は?108は何故神聖な数字なのか?108回オームマントラ唱える理由は?
https://royalraymond.healwithrife.com/entry/2024/01/31/235140

108は何故神聖な数字なのか?108回オームマントラ唱える理由は?
https://royalraymond.healwithrife.com/entry/2024/01/31/215006

「SHIBUYA 109」の由来。語呂合わせだった。10=とう、9=きゅう。
https://royalraymond.healwithrife.com/entry/2024/01/13/085331


ゲマトリアカバラ数秘術・語呂合わせのまとめ
https://royalraymond.healwithrife.com/entry/2024/02/03/203705

 

 

 

 

 

 

 

 

 

赤ちゃんの産声が440hz(ㇻの音)という嘘。実はマチマチだった。これは何かしらの暗号/比喩/陰謀なのか?

赤ちゃんの産声が世界共通で 440hz って説があります。

 

本当かな?

と思って、

実際に赤ちゃんの産声の周波数を、

周波数測定アプリを使って測ってみました。

 

赤ちゃんの産声の動画はYoutubeに沢山あります。

そこで、何人かの赤ちゃんの産声の周波数を試しに測ってみました。

 

そしたら、どの赤ちゃんの周波数もマチマチでした。

440Hzに安定なんかしていません。

 

あんなに一生懸命に泣いているのに、

そんなに周波数が安定するはずがありません。

 

赤ちゃんの産声が全世界共通で440hz(ㇻの音)という説は、

明らかに嘘ですね。

 

しかも、全世界共通で440hzとかいう説なんですが、

これを英語でネット検索してもこんな情報は全く出てきません。

日本でだけで流行っている説なのかなと思います。

誰がどういう意図でこんな明らかな嘘を広めたんだろう?

 

これは素人が周波数測定アプリを使って簡単に調べられます。

無料のiPhoneアプリを使って周波数測って確認するだけですから、

誰でも簡単にこの嘘は見ぬけます。

 

もしかしたら、何らかの暗号/比喩/陰謀がこれに関わっているかもしれません。

 

ちなみに、440Hzはがん細胞を破壊する周波数だそうです。

 

また、A=440Hzは基準ピッチとしてはよくないそうです。
A=432Hzが基準ピッチとしては良いそうです。

 

で、じゃあ、結局、

赤ちゃんの産声は何ヘルツですか?

 

それは、赤ちゃんによります。

しかも、産声のタイミングによります。

 

ちなみに、下記のような動画の赤ちゃんの産声の周波数を測ってみた感じです。

www.youtube.com

 

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周波数測定アプリは、
iPhoneアプリアップルストアからインストールして使いました。

 

みなさんも、お試しを。

 

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587.33Hz がん細胞を死滅させる?周波数 30分 純サイン波.mp3|Heal with Rife ライフ周波数療法

 

 

note.com

ameblo.jp

ameblo.jp

 

ガ​ン​の​症​状​緩​和​の​音​・​ラ​イ​フ​周​波​数 1 587​.​33Hz 444 Hz 2127 Hz 2008 Hz 727 Hz 787 Hz 880 Hz 690 Hz 666 Hz
 
ガ​​​ン​​​の​​​症​​​状​​​緩​​​和​​​の​​​音​​​・​​​ラ​​​イ​​​フ​​​周​​​波​​​数 2 バ​イ​ノ​ー​ラ​ル​ビ​ー​ト 587​​​.​​​33Hz 444 Hz 727 Hz 787 Hz 880 Hz 690 Hz 666 Hz